Совигрипп.ru | Бактериофаг.ru | Релатокс.ru

Диагностикум риккетсиозный Сибирика для РСК

Срок годности

5 лет.

Производитель

ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России: 115088, г. Москва, ул. 1-ая Дубровская, д.15

Состав

В комплект Набора реагентов входят:

  • Диагностикум риккетсиозный Сибирика для РСК – 10 ампул;
  • Сыворотка диагностическая к риккетсиям Сибирика для РСК – 3 ампулы.
  1. Диагностикум риккетсиозный Сибирика для РСК. Представляет собой антигенный комплекс, выделенный методом эфирной обработки из риккетсий Сибирика, выращенных в желточных мешках развивающихся куриных эмбрионов и инактивированных фенолом, лиофилизированный из объема 1,0 мл. Консервант – фенол.

    Представляет собой порошок или аморфную массу от желтовато-белого до коричневато-розового цвета.

  2. Сыворотка диагностическая к риккетсиям Сибирика для РСК. Получена из крови продуцентов (морских свинок или лошадей) после заражения вирулентной культурой риккетсий Сибирика, инактивирована, лиофилизирована из объема 0,1 мл.

    Стабилизатор – сахароза в конечной концентрации 2 %.

    Представляет собой аморфную массу или таблетку желтоватого или розоватого цвета.

Показания для применения

Предназначен для серологической диагностики клещевого сыпного тифа Северной Азии.

Режим дозирования и способ применения

Перед постановкой реакции определяют рабочее разведение комплемента и рассчитывают его необходимое количество.

  1. Определение рабочего разведения комплемента
    1. Титрование комплемента для основного опыта осуществляют непосредственно перед его использованием.
    2. Готовят рабочее разведение гемолитической сыворотки, соответствующее утроенному ее титру. Например, при титре 1:1200 к 0,1 мл гемолитической сыворотки добавляют 39,9 мл натрия хлорида раствора 0,9 % (разведение 1:400).
    3. Готовят гемолитическую систему: смешивают равные объемы 3 % взвеси эритроцитов барана и рабочего разведения гемолитической сыворотки. Гемолитическую систему выдерживают при температуре (37±1) ºС в течение (30±2) мин.
    4. Готовят разведение комплемента 1:10 в натрия хлориде растворе 0,9 %. Для этого со-держимое ампулы растворяют в 10 мл натрия хлорида раствора 0,9 %.
    5. В ряд из 10 пробирок микропипеткой отмеряют от 0,01 до 0,1 мл комплемента, разве-денного 1:10.
    6. Доводят объём в каждой пробирке натрия хлорида раствором 0,9 % до 0,6 мл.
    7. В каждую пробирку добавляют по 0,4 мл гемолитической системы.
    8. Перемешивают содержимое пробирок встряхиванием до получения гомогенной взвеси эритроцитов. Пробирки выдерживают в термостате при температуре (37±1) ºС в течение (30±2) мин.
    9. Результаты реакции учитывают сразу после выдержки и обозначают крестами: ++++ - отсутствие гемолиза: жидкость над осадком эритроцитов не окрашена; +++ - следы гемолиза: жидкость над осадком эритроцитов слегка окрашена в розовый цвет; ++ - ясный гемолиз: жидкость над осадком красноватого цвета, значительный осадок на дне пробирки; + - почти полный гемолиз: жидкость красного цвета, незначительный осадок эритроцитов; – - полный гемолиз: жидкость красного «лакового» цвета, осадка на дне пробирки нет.
    10. За одну единицу комплемента принимают его количество, содержащееся во второй пробирке с полным гемолизом (в данном случае 0,07 мл комплемента в разведении 1:10, что соответствует 0,007 мл неразведённого комплемента). РСК проводят как при температуре 2 – 8 ºС в течение 18 – 20 ч («холодное» связывание), так и при температуре 36 – 38 ºС в течение 55 – 65 мин («горячее» связывание).

      Рабочее разведение комплемента при «холодном» связывании составляет две единицы, при «горячем» связывании – одну единицу комплемента.

  2. Расчет необходимого количества комплемента.
  3. Реакцию ставят в общем объёме 1 мл:

    • 0,2 мл разведенной исследуемой сыворотки;
    • 0,2 мл диагностикума в рабочем разведении;
    • 0,2 мл комплемента в рабочем разведении;
    • 0,4 мл гемолитической системы.

    Пример расчёта необходимого количества комплемента для постановки реакции методом «холодного» связывания: в приведённом выше примере 2 единицы комплемента соответствуют 0,007 мл × 2 = 0,014 мл неразведенного комплемента. Для постановки реакции на 100 пробирках необходимо взять 0,014 мл × 100 = 1,4 мл неразведенного комплемента. При этом количество натрия хлорида раствора 0,9 %, которое должно быть добавлено к данному объему комплемента, составит 0,2 мл × 100 – 1,4 мл =18,6 мл.

    Для постановки реакции методом «горячего» связывания на 100 пробирках необходимо взять 0,007 мл × 100 = 0,7 мл неразведенного комплемента и развести его в 19,3 мл натрия хлорида раствора 0,9 %.

  4. Постановка РСК для серологической диагностики клещевого сыпного тифа Северной Азии.
    1. Содержимое ампулы с диагностикумом растворяют в натрия хлориде растворе 0,9 % в объеме, указанном на этикетке ампулы.
    2. В пробирках готовят последовательные двукратные разведения от 1:10 до 1:1280 исследуемых инактивированных сывороток на натрия хлориде растворе 0,9 % в объеме 0,2 мл.
    3. В каждую пробирку с сывороткой добавляют по 0,2 мл диагностикума в рабочем разведении.
    4. В каждую пробирку добавляют 0,2 мл комплемента в рабочем разведении.
    5. Реакцию сопровождают следующим контролем:
      1. Контроль соответствия заявленного титра диагностической сыворотки, выпускаемой в комплекте с диагностикумом. Содержимое ампулы регидратируют в 1 мл натрия хлори-да раствора 0,9%, получая разведение сыворотки 1:10. В пробирках готовят последовательные двукратные разведения сыворотки от 1:10 до 1:320 (при титре 1:160) или от 1:10 до 1:640 (при титре 1:320) в объеме 0,2 мл. В каждую пробирку с разведениями диагностической сыворотки добавляют 0,2 мл диагностикума в рабочем разведении и 0,2 мл комплемента в рабочей дозе.
      2. Контроль исследуемых и диагностической сывороток на антикомплементарность: к 0,2 мл минимального разведения (1:10) каждой сыворотки добавляют по 0,2 мл натрия хлорида раствора 0,9 % и по 0,2 мл комплемента в рабочем разведении.
      3. Контроль диагностикума на антикомплементарность: к 0,2 мл диагностикума в рабочем разведении добавляют 0,2 мл натрия хлорида раствора 0,9 % и 0,2 мл комплемента в рабочем разведении.
      4. Контроль правильности рабочей дозы комплемента: в три пробирки вносят 0,2 мл, 0,1 мл и 0,05 мл комплемента в рабочем разведении и 0,4 мл, 0,5 мл и 0,55 мл натрия хлорида раствора 0,9 % соответственно.
      5. Контроль гемолитической системы: в пробирку наливают 0,6 мл натрия хлорида раствора 0,9 %.
    6. Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием и выдерживают при температуре 2–8 ºС в течение 18 – 20 ч («холодное» связывание) или при температуре 36 – 38 ºС в течение 55–65 мин («горячее» связывание), после чего в каждую пробирку добавляют 0,4 мл гемолитической системы, предварительно прогретой в течение 28–32 мин при температуре 36–38 °С. Содержимое пробирок снова перемешивают встряхиванием и выдерживают при температуре 36 – 38 ºС в течение 20-30 мин, ориентируясь на завершение реакции в пробирках контроля рабочей дозы комплемента: в первых двух пробирках должен быть полный гемолиз (–), в третьей пробирке – задержка гемолиза не менее чем на +++.

Меры предосторожности при применении

Набор реагентов специфически безопасен. Входящие в состав набора компоненты инактивированы. Однако исследуемые материалы, сточные растворы, оборудование и материалы, находящиеся с ними в контакте, представляют собой потенциально инфекционный материал, и обращаться с ним следует осторожно. Класс потенциального риска применения по ГОСТ Р 51609-2000 − 2б.

Сточные растворы, пробы, оборудование, находившееся в контакте с биологическими образцами, лабораторную посуду следует обеззараживать в соответствии с СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности)» (раздел «Риккетсии»).

Сточные растворы и пробы обеззараживают:

  • кипячением в течение 30 мин;
  • или автоклавированием под давлением 0,2 МПа при (132±2) °С в течение 45 мин.
Оборудование обеззараживают двукратным протиранием раствором хлорамина 3 % или раствором пероксида водорода 6 % с интервалом 15 мин.

Лабораторную посуду обеззараживают:
  • погружением в раствор хлорамина 3 % или раствор пероксида водорода 6 % с 0,5 % моющего средства на 2 часа;
  • или кипячением в течение 60 мин в растворе соды 2 %;
  • или автоклавированием под давлением 0,15 МПа при (126±2) °С в течение 60 мин.

Задать вопрос

Категория вопроса *

Подписаться на новости