Национальный производитель
иммунобиологических препаратов в России
24 ноября 2017 года, 10:26 (МСК)

Поли-ИЭФ Сыворотка для иммуноэлектрофореза против сывороточных белков крови человека сухая

Медицинские изделия для диагностики IN VITRO
Срок годности
3 года.
Производитель
ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России:Россия, 603950, Нижегородская область, г. Нижний Новгород, ул. Грузинская, 44

Описание
Сыворотка для ИЭФ содержит антитела против белков сыворотки крови человека. В иммуноэлектрофорезе с нормальной сывороткой крови человека препарат должен выявлять не менее 15 линий преципитации в соответствующих зонах: в a-зоне – альбумин, a2-макроглобулин; в β-зоне – трансферрин, церулоплазмин; в γ-зоне – линии IgG, IgА, IgМ и др.
Сыворотка должна полностью растворяться в течение 5 мин после добавления в ампулу (флакон) 1,0 мл воды очищенной. После растворения сыворотка должна быть прозрач¬ной, без осадка и посторонних включений, розова¬то-желтого цвета. Допустима небольшая опалесценция в проходящем свете.


Форма выпуска
Выпускается в ампулах по 1 мл (10 флаконов).
Состав
Сыворотка для иммуноэлектрофореза против сывороточных белков крови человека сухая представляет собой лиофилизат иммунной сыворотки крови овец,  иммунизированной нормальной сывороткой крови человека. 
Набор состоит из сыворотки для иммуноэлектрофореза против сывороточных белков крови человека.

Сыворотка для ИЭФ против сывороточных белков крови человека. Пористая масса от беловато-серого до розовато-желтого цвета 10 ампул (флаконов) по 1 мл
Показания для применения
Предназначена для качественного и количественного определения иммуноглобулинов и различных белков в сыворотке крови, других биологических жидкостях человека и препаратах крови методом иммуноэлектрофореза (ИЭФ).

Режим дозирования и способ применения
Анализируемые образцы следует хранить при температуре от 2 до 8 °С в течение 7 сут или при температуре не выше минус 18 °С не более 1 года. Замороженные образцы перед исследованием следует разморозить и тщательно перемешать путем встряхивания. Повторное замораживание не допускается. 

 ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАГЕНТЫ И МАТЕРИАЛЫ 
Оборудование: прибор для иммуноэлектрофореза с выпрямителем электрического тока, весы аналитические, плитка электрическая, рН-метр, холодильник, предметный столик с регулируемым уровнем, пластины стеклянные (90 × 120) мм, влажная камера, мерная посуда, дозаторы пипеточные со сменными наконечниками, контейнер для обеззараживания.
Реагенты и материалы: 
– агар;
– амидо черный 10Б;
– веронал;
– вода очищенная;
– глицерин;
– кислота борная;
– кислота уксусная;
– мединал;
– мертиолят (тимерозал);
– натрий тетраборнокислый 10-водный;
– натрия хлорид;
– пиронин Б;
– бумага фильтровальная лабораторная;
– перчатки одноразовые;
– дезинфицирующие растворы.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Иммуноэлектрофорез.
Метод ИЭФ основан на способности заряженных частиц перемещаться в агаровом геле под действием электрического поля и на специфической преципитации этих частиц соответствующими иммунными сыворотками с образованием видимых иммунных комплексов.
Вскрыть ампулы (флаконы) с сывороткой для ИЭФ и растворить содержимое каждой в 1,0 мл воды очищенной.
Приготовление буферных растворов.
Веронал-мединаловый буферный раствор 0,05 М рН 8,6±0,1 (веронал – 1,38 г, мединал – 8,76 г, вода очищенная до 1 л); 
Боратный буферный раствор, 0,05 М, рН 8,6±0,1 (борная кислота – 6,7 г, натрий тетраборнокислый 10-водный – 13,4 г, вода очищенная – до 1 л).
Использовать любой из приведенных буферных растворов.
Перед заливкой буферного раствора в электродные камеры прибора для ИЭФ, его следует развести водой очищенной в 2 раза.
Приготовление натрия хлорида раствора 0,9 %.
9 г натрия хлорида перенести в мерную колбу на 1 л, налить воду очищенную до метки и перемешать до полного растворения.

Приготовление красящего раствора.
1 г амидо черного 10 Б перенести в мерную колбу вместимостью 1 л, налить небольшое количество воды очищенной, прилить 70 мл кислоты уксусной, довести объем водой очищенной до метки и перемешать. 
Приготовление раствора для отмывки агара после окрашивания.
В мерную колбу вместимостью 1 л налить 25 мл кислоты уксусной, добавить 20 мл глицерина, довести объем водой очищенной до метки и перемешать.
Приготовление агарового геля 1 % на буферном растворе.
Количество агарового геля должно быть рассчитано заранее в зависимости от числа пластин. 1 г агара перенести в стакан, 2-3 раза промыть водой очищенной и варить на кипящей водяной бане в 50 мл воды очищенной до полного растворения. Сваренный агар перенести в мерный цилиндр объемом 100 мл и довести уровень содержимого до метки подогретым буферным раствором. Внести 0,1 г мертиолята и перемешать. Агаровый гель должен быть однороден, прозрачен и не должен содержать механических примесей.

Заливка стеклянных пластин агаровым гелем.
На уравновешенный с помощью уровня предметный столик установить стеклянные пластины (90±120) мм. Расплавленный и охлажденный до температуры (55±5) °С агар осторожно нанести на стеклянные пластины из расчета 20 мл расплавленного агара на пластину. После застывания агара пластины установить в приборе для ИЭФ. Агаровый гель на пластинах соединить с буферным раствором в электродных камерах прибора с помощью фильтровальной бумаги, сложенной в 5-6 слоев. 
Соединение агара на пластинах с буферным раствором возможно и с помощью агаровых мостиков.

Проведение ИЭФ.
В слое агара пробить лунки, используя для этого специальный штамп, а после проведения электрофореза вырезать поперечные канавки.
После удаления из лунок агара заполнить их с помощью пипеточного дозатора растворенной контрольной сывороткой крови человека и анализируемыми образцами. В одну из лунок внести краситель пиронин Б (для контроля продвижения фракций).  
Прибор для ИЭФ накрыть крышкой с платиновыми электродами и подсоединить к выпрямителю электрического тока. Электрофорез проводить при напряжении 70-150 В и силе тока 10-50 мА в течение 2-3 ч. Процесс электрофореза остановить, когда пятно пиронина, соответствующее миграции альбумина, будет находиться на расстоянии 20-25 мм от лунки.
После проведения электрофореза извлечь пластины из прибора. Внести в канавки растворенную сыворотку для ИЭФ. Пластины поместить во влажную камеру и выдержать в холодильнике при температуре (5±3) °С в течение 48 ч.
2.png

После инкубации в агаровом геле образуются линии преципитации.
 1.png
Окрашивание агара.
Пластины можно фотографировать контактным методом или в проходящем свете или высушивать и окрашивать раствором амидо черного 10 Б. Для этого пластины поместить в кюветы, залить натрия хлорида раствором 0,9 % и выдержать в течение 16-18 ч для отмывания от непреципитировавших белков. Затем пластины с агаровым гелем накрыть фильтровальной бумагой, смоченной в натрия хлорида растворе 0,9 %, и высушить на воздухе до превращения агарового геля в тонкую пленку. 
С высушенных пластин снять фильтровальную бумагу и поместить в кюветы с красящим раствором на 30-40 мин. Затем отмыть в растворе для отмывки агара после окрашивания в течение 5-10 мин и снова высушить. 

Учет результатов. 
Учет результатов проводить визуально.

Меры предосторожности при применении
Все компоненты набора нетоксичны. Анализируемые образцы могут быть потенциально опасны. Поэтому при работе следует использовать средства индивидуальной защиты, а образцы и использованные материалы после проведения анализа обеззараживать раствором перекиси водорода 6 % или раствором хлорамина Б 3 % в течение 2 ч.