Диагностикум риккетсиозный Провачека для РСК

Описание

Форма выпуска

Состав

В cостав Набора реагентов входят:

Диагностикум риккетсиозный Провачека для РСК – 10 ампул;
Сыворотка диагностическая к риккетсиям Провачека для РСК – 3 ампулы.

Показания для применения

Способ применения

Перед постановкой реакции определяют рабочее разведение комплемента и рассчитывают его необходимое количество.

Определение рабочей дозы комплемента

Титрование комплемента для основного опыта осуществляют непосредственно перед его использованием.

Готовят рабочее разведение гемолитической сыворотки, соответствующее утроенному ее титру. Например, при титре 1:1200 к 0,1 мл гемолитической сыворотки добавляют    39,9 мл натрия хлорида раствора 0,9 % (разведение 1:400).

Готовят гемолитическую систему: смешивают равные объемы 3 % взвеси эритроцитов барана и рабочего разведения гемолитической сыворотки. Гемолитическую систему выдерживают при температуре (36-38) ºС в течение (28-32) мин.

Готовят разведение комплемента 1:10 в натрия хлорида растворе 0,9 %. Для этого содержимое ампулы растворяют в 10 мл натрия хлорида раствора 0,9%.

В ряд из 10 пробирок микропипеткой отмеряют от 0,01 до 0,1 мл комплемента, разведенного 1:10.

доводят объём в каждой пробирке натрия хлорида раствором 0,9 % до 0,6 мл.

В каждую пробирку добавляют по 0,4 мл гемолитической системы.

Перемешивают содержимое пробирок встряхиванием до получения гомогенной взвеси эритроцитов. Пробирки выдерживают в термостате при температуре (36-38) ºС в течение (28-32) мин.

Результаты реакции учитывают сразу после выдержки и обозначают крестами:

++++ - отсутствие гемолиза: жидкость над осадком эритроцитов не окрашена;

+++ - следы гемолиза: жидкость над осадком эритроцитов слегка окрашена в розовый цвет;

++ - ясный гемолиз: жидкость над осадком красноватого цвета, значительный осадок на дне пробирки;

+ - почти полный гемолиз: жидкость красного цвета, незначительный осадок эритроцитов;

–  - полный гемолиз: жидкость красного «лакового» цвета, осадка на дне пробирки нет.

Пример титрования комплемента

За одну единицу комплемента принимают его количество, содержащееся во второй пробирке с полным гемолизом (в данном случае 0,07 мл комплемента в разведении 1:10, что соответствует 0,007 мл неразведённого комплемента).

  РСК проводят как при температуре 2 – 8 ºС в течение 18 – 20 ч («холодное» связывание), так и при температуре 36 – 38 ºС в течение 55 – 65 мин («горячее» связывание).

Рабочая доза комплемента при «холодном» связывании составляет две единицы, при «горячем» связывании – одну единицу комплемента.

Расчет необходимого количества комплемента.

Реакцию ставят в общем объёме 1 мл:

-   0,2 мл разведенной исследуемой сыворотки;

-   0,2 мл диагностикума в рабочем разведении;

-   0,2 мл комплемента в рабочем разведении;

-   0,4 мл гемолитической системы.

Пример расчёта необходимого количества комплемента для постановки реакции методом «холодного» связывания: в приведённом выше примере 2 единицы комплемента соответствуют 0,007 мл × 2 = 0,014 мл неразведенного комплемента. Для постановки реакции на 100 пробирках необходимо взять 0,014 мл × 100 = 1,4 мл неразведенного комплемента. При этом количество натрия хлорида 0,9 % раствора, которое должно быть добавлено к данному объему комплемента, составит 0,2 мл × 100 – 1,4 мл =18,6 мл. Таким образом, общий объем комплемента в рабочем разведении на 100 пробирок реакции составит 20 мл.

Для постановки реакции методом «горячего» связывания на 100 пробирках необходимо взять 0,007 мл × 100 = 0,7 мл неразведенного комплемента и развести его в 19,3 мл натрия хлорида раствора 0,9 %.

Постановка РСК для серологической диагностики эпидемического сыпного тифа и болезни Брилля.

Содержимое ампулы с диагностикумом растворяют в натрия хлориде растворе 0,9 % в объеме, указанном на этикетке ампулы.

В пробирках готовят последовательные двукратные разведения от 1:10 до 1:1280 исследуемых инактивированных сывороток на натрия хлориде растворе 0,9 % в объеме 0,2 мл.

В каждую пробирку с сывороткой добавляют по 0,2 мл диагностикума в рабочем разведении.

В каждую пробирку добавляют 0,2 мл комплемента в рабочем разведении.

Реакцию сопровождают следующими контролями:

Контроль соответствия заявленного титра диагностической сыворотки, выпускаемой в комплекте с диагностикумом. Содержимое ампулы регидратируют в 1 мл натрия хлорида раствора 0,9 %, получая разведение сыворотки 1:10. В пробирках готовят последовательные двукратные разведения сыворотки от 1:10 до 1:320 (при титре 1:160) или от 1:10 до 1:640 (при титре 1:320) в объеме 0,2 мл. В каждую пробирку с разведениями диагностической сыворотки добавляют 0,2 мл диагностикума в рабочем разведении и 0,2 мл комплемента в рабочей дозе.

Контроль исследуемых и диагностической сывороток на антикомплементарность: к      0,2 мл минимального разведения (1:10) каждой сыворотки добавляют по 0,2 мл натрия хлорида раствора 0,9 % и по 0,2 мл комплемента в рабочем разведении.

Контроль диагностикума на антикомплементарность: к 0,2 мл диагностикума в рабочем разведении добавляют 0,2 мл натрия хлорида раствора 0,9 % и 0,2 мл комплемента в рабочем разведении.

Контроль правильности рабочей дозы комплемента: в три пробирки вносят 0,2 мл, 0,1 мл и 0,05 мл комплемента в рабочем разведении и 0,4 мл, 0,5 мл и 0,55 мл натрия хлорида раствора 0,9% соответственно.

Контроль гемолитической системы: в пробирку наливают 0,6 мл натрия хлорида раствора 0,9 %.

Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием и выдерживают при температуре 2–8 ºС в течение 18–20 ч («холодное» связывание) или при температуре 36 – 38 ºС в течение     55–65 мин («горячее» связывание), после чего в каждую пробирку добавляют 0,4 мл гемолитической системы, предварительно прогретой в течение 28–32 мин при температуре 36–38 °С. Содержимое пробирок снова перемешивают встряхиванием и выдерживают при температуре 36 – 38 ºС в течение 20-30 мин, ориентируясь на завершение реакции в пробирках контроля рабочей дозы комплемента: в первых двух пробирках должен быть полный гемолиз (–), в третьей пробирке – задержка гемолиза не менее чем на +++.

РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

Результаты реакции учитывают визуально через 1ч после выдержки при комнатной температуре. Реакцию считают достоверной, если в контроле реакции получены следующие результаты:

· в контроле диагностикума, исследуемых и диагностической сывороток на антикомплементарность - полный гемолиз (-);

· в контроле диагностической сыворотки на соответствие заявленному титру задержка гемолиза до заявленного титра не менее чем ++;

· в контроле гемолитической системы задержка гемолиза на ++++.

За титр исследуемой сыворотки принимают ее максимальное разведение, дающее  задержку гемолиза с диагностикумом не менее чем на ++. Диагностическим титром исследуемой сыворотки является положительная реакция с разведения 1:160.

При заболевании эпидемическим сыпным тифом или болезнью Брилля РСК становится положительной со 2-ой недели болезни в разведении сыворотки 1:160 – 1:320, максимальных величин комплементсвязывающие антитела достигают на 3-ей неделе заболевания (1:640 – 1:1280).

Меры предосторожности при применении

Класс  потенциального  риска   применения  − 2б.

Набор реагентов специфически безопасен. Входящие в состав набора компоненты инактивированы. Однако исследуемые материалы, сточные растворы, оборудование и материалы, находящиеся с ними в контакте, представляют собой потенциально инфекционный материал, и обращаться  с  ним  следует  осторожно.  

Сточные растворы, пробы, оборудование, находившееся в контакте с биологическими образцами, лабораторную посуду следует обеззараживать в соответствии с СП 1.3.3118-13 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)» (Раздел «Риккетсии»).

Работать с соблюдением  правил техники безопасности в соответствии с ГОСТ Р 52905-2007 «Лаборатории медицинские. Требования безопасности».

Оборудование обеззараживают двукратным протиранием раствором хлорамина 3 % или раствором пероксида водорода 6 % с интервалом 15 мин.

Лабораторную посуду, сточные растворы  и пробы  обеззараживают:

- погружением в раствор хлорамина 3 % или раствор пероксида водорода 6 % с 0,5 % моющего средства на 2 часа;

- или кипячением в течение 60 мин в растворе соды 2 %;

- или автоклавированием под давлением (0,15±0,015) МПа при (126±2) ^оС  в течение                   60 мин.