Описание
Положительно реагирующие тест-штаммы должны изменять цвет субстрата в растворенном виде или цвет полоски в соответствии с таблицей учета результатов исследования.
Форма выпуска
Выпускают в наборе из 13 тестов: 12 флаконов с СИБ-дисками, 2 пробирки с СИБ-полосками.
Состав
Системы индикаторные бумажные (СИБ) для идентификации микроорганизмов (набор диагностический) представляют собой диски или полоски хроматографической бумаги, содержащие определенные количества субстрата в сочетании с индикатором, стабилизированные пленкообразующим покрытием - поливиниловым спиртом.
СИБ выпускают в наборе из 13 тестов: 12 флаконов с СИБ-дисками (СИБ с сорбитом, инозитом, лизином, орнитином, цитратом натрия, малонатом натрия, для определения -галактозидазы, уреазы, фенилаланиндезаминазы (1 флакон-СИБ с фенилаланином, 1 флакон-СИБ с хлоридом железа), сероводорода, для реакции Фогеса -Проскауэра) и 2 пробирки с СИБ-полосками (СИБ для определения оксидазы и индола). СИБ-диски выпускают во флаконах, СИБ-полоски в пробирках в картонной пачке с инструкцией по применению.
Набор № 2 обеспечивает проведение 50 анализов.
Показания для применения
Определение ферментативной активности микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae и их идентификация.
Способ применения
ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ
• Термостат, обеспечивающий температуру (37±1) °С;
• Автоклав;
• Пробирки стеклянные;
• Чашки Петри;
• Пинцеты;
• Петля бактериологическая;
• Палочка стеклянная;
• Вата медицинская гигроскопическая;
• Раствор натрия хлорида 0,9% рН 7,3±0,1 стерильный;
• Фосфатно-солевой буферный раствор рН 5,5±0,2 (ТУ 9389-117-14237183-08);
• Масло вазелиновое стерильное;
• α-нафтола спиртовой раствор 6 %;
• Натрия гидроокиси раствор 40%.
АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Объекты исследований в санитарной и клинической микробиологии.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Основные требования, предъявляемые при работе с набором реагентов
«Системы индикаторные бумажные для идентификации микроорганизмов. Набор № 2 для межродовой и видовой дифференциации энтеробактерий»:
- исследования проводят с чистой культурой, а также с отдельными колониями
непосредственно с чашек с дифференциально-диагностическими средами (среда Эндо, Плоскирева, висмут-сульфит агар);
- погружение дисков в пробирки производят обожженным пинцетом;
- для получения четких результатов необходимо соблюдение температурного
режима термостата (37±1) °С, рН применяемых питательных сред и режима обработки посуды.
Определение оксидазной активности.
Культуру, выросшую на поверхности питательного агара для культивирования микроорганизмов в течение 18-24 ч при температуре (37±1) °С, растирают платиновой петлей или стеклянной палочкой на индикаторной полоске СИБ, помещенной в чашку Петри. На одной полоске можно исследовать 10-14 культур (не более).
Определение утилизации углеводов и многоатомных спиртов.
В пробирке с 0,3 мл стерильного натрия хлорида раствора 0,9 % рН 7,3±0,1 суспендируют полную петлю культуры, выросшей на поверхности питательного агара для культивирования микроорганизмов в течение 18-24 ч при температуре (37±1) °С. Затем погружают СИБ-диск с соответствующим углеводом или многоатомным спиртом. Среда в пробирках в результате быстрой диффузии в нее индикатора становится красной. В случае необходимости учета газообразования рекомендуется использовать небольшой комочек стерильной гигроскопической ваты, который помещают в пробирку. В качестве контроля служат СИБ-диски, погруженные в пробирки со стерильным натрия хлорида раствором 0,9 % рН 7,3±01. Инкубируют пробирки при температуре (37±1) °С.
Определение активности - галактозидазы.
В пробирке с 0,3 мл стерильного натрия хлорида раствора 0,9 % рН 7,3±0,1 суспендируют полную петлю культуры, выросшей на поверхности питательного агара для культивирования микроорганизмов в течение 18-24 ч при температуре (37±1) °С, затем в эту взвесь помещают СИБ-диск. В качестве контроля используют СИБ-диск, помещенный в пробирку со стерильным натрия хлорида раствором 0,9 %. Инкубируют при температуре (37±1) °С.
Определение индолообразования.
В пробирке с 0,3 мл стерильного натрия хлорида раствора 0,9 % рН 7,3±0,1 суспендируют полную петлю культуры, выросшей на поверхности питательного агара для культивирования микроорганизмов в течение 18-24 ч при температуре (37±1) °С. Полоску для определения индола складывают по намеченной на ней линии вдвое и пинцетом опускают на дно пробирки так, чтобы длинный бесцветный конец погрузился в суспензию культуры, а короткий окрашенный конец находился над поверхностью суспензии. В качестве контроля используют полоску, помещенную в пробирку со стерильным натрия хлорида раствором 0,9 % рН 7,3±0,1. Инкубируют при температуре (37±1) °С.
Определение уреазной активности.
В пробирке с 0,3 мл стерильного натрия хлорида раствора 0,9 % рН 7,3±0,1 суспендируют полную петлю культуры, выросшей на поверхности питательного агара для культивирования микроорганизмов в течение 18-24 ч при температуре (37±1) °С, затем в эту взвесь погружают СИБ-диск с мочевиной. В качестве контроля используют СИБ-диск, помещенный в пробирку со стерильным натрия хлорида раствором 0,9 % рН 7,3±0,1. Инкубируют при температуре (37±1) °С.
Определение декарбоксилаз лизина, орнитина.
В пробирке с 0,3 мл стерильного фосфатно-солевого буферного раствора рН 5,5±0,2 суспендируют полную петлю культуры, выросшей на поверхности питательного агара для культивирования микроорганизмов в течение 18-24 ч при температуре (37±1) °С, затем в эту взвесь погружают СИБ-диск с одной из аминокислот: лизином, орнитином и вносят 0,2 мл стерильного вазелинового масла. В качестве контроля используют СИБ-диски с соответствующими аминокислотами, погруженные в пробирки со стерильным фосфатно-солевым буферным раствором рН 5,5±0,2 с добавлением 0,2 мл стерильного вазелинового масла. Инкубируют при температуре (37±1)°С.
Определение активности фенилаланиндезаминазы.
В пробирке с 0,3 мл стерильного натрия хлорида раствора 0,9 % рН 7,3±0,1 суспендируют полную петлю культуры, выросшей на поверхности питательного агара для культивирования микроорганизмов в течение 18-24 ч при температуре (37±1) °С, затем в эту взвесь погружают СИБ-диск с фенилаланином. В качестве контроля используют СИБ-диск, помещенный в пробирку со стерильным натрия хлорида раствором 0,9 %. Инкубируют при температуре (37±1) °С. После инкубации в течение 1-2 ч в пробирки помещают СИБ-диски с хлоридом железа.
Определение образования сероводорода.
СИБ диск на сероводород помещают в бактериологическую пробирку на поверхность питательного агара, содержащего 0,5-0,7 % агара микробиологического рН 7,3±0,1, засеянного бактериологической петлей уколом культурой, выросшей на поверхности питательного агара для культивирования микроорганизмов в течение 18-24 ч при температуре (37±1) °С. В качестве контроля используют пробирку со стерильным питательным агаром, на поверхность которого помещают СИБ-диск. Инкубируют при температуре (37±1) °С.
Определение утилизации цитрата и малоната натрия.
В пробирке с 0,3 мл стерильного фосфатно-солевого буферного раствора рН 5,5±0,2 суспендируют полную петлю культуры, выросшей на поверхности питательного агара для культивирования микроорганизмов в течение 18-24 ч при температуре (37±1) °С, затем в эту взвесь помещают СИБ-диск с цитратом или малонатом натрия. В качестве контроля используют СИБ-диски, помещенные в пробирки со стерильным фосфатно-солевым буферным раствором рН 5,5±0,2. Инкубируют при температуре (37±1) °С.
Определение ацетилметилкарбинола (реакция Фогеса-Проскауэра).
В пробирке с 0,3 мл стерильного натрия хлорида раствора 0,9 % рН 7,3±0,1 суспендируют полную петлю культуры, выросшей на поверхности питательного агара для культивирования микроорганизмов в течение 18-24 ч при температуре (37±1) °С, затем в эту взвесь помещают СИБ-диск. В качестве контроля используют СИБ-диск, погруженный в пробирку со стерильным натрия хлорида раствором 0,9 % рН 7,3±0,1. Через 18-24 ч инкубации при температуре (37±1) °С в пробирки закапывают по 1-2 капле α-нафтола спиртового раствора 6 % и натрия гидроокиси раствора 40 % и выдерживают 15-20 мин при температуре (37±1) °С.
Примечание: стерильный натрия хлорида раствор 0,9 % рН 7,3±0,1; натрия гидроокиси раствор 40 % и α-нафтола спиртовой раствор 6 % готовит потребитель (хранение α-нафтола спиртового раствора 6 % в посуде из темного стекла при 20-25 °С не более 7 дней, хранение натрия гидроокиси раствора 40 % при 20-25 °С - 6 месяцев).
РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Регистрацию результатов анализа проводят визуально.
Меры предосторожности при применении
Соблюдение «Правил устройства, техники безопасности производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения» (Москва, 1981 г.).
Обезвреживание. Использованные СИБ обезвреживают автоклавированием водяным насыщенным паром под давлением 1,5 кГс/см2 при температуре (126±2) °С в течение 1 часа.
