Изделие для диагностики ин витро предназначено для определения общих и термотолерантных колиформных бактерий при контроле качества воды по биохимической активности хромогенным методом. Набор № 3 предназначен для санитарно-бактериологического анализа воды титрационным методом, Набор № 4 - для санитарно-бактериологического анализа воды методом мембранной фильтрации.
Функциональное назначение теста, выполняемого с помощью изделия - вспомогательное средство в санитарно-бактериологическом анализе воды.
Показания к применению изделия в соответствии с его назначением. Противопоказания при применении изделия – отсутствуют.
СОСТАВ МЕДИЦИНСКОГО ИЗДЕЛИЯ И ЕГО КОМПОНЕНТОВ
Варианты исполнения.
I. Набор реагентов «Системы индикаторные бумажные для идентификации микроорганизмов. Набор № 3 для санитарно-бактериологического анализа воды».
Состав изделия:
II. Набор реагентов «Системы индикаторные бумажные для идентификации микроорганизмов. Набор № 4 для санитарно-бактериологического анализа воды».
Состав изделия:
Комплектация.
Набор реагентов «Системы индикаторные бумажные для идентификации микроорганизмов. Набор № 3 для санитарно-бактериологического анализа воды»: изделие (1 флакон (50 дисков) - СИБ с лактозой; 1 пробирка (5 полос) СИБ для определения оксидазы), инструкция по применению, паспорт (в комплекте поставки).
Набор реагентов «Системы индикаторные бумажные для идентификации микроорганизмов. Набор № 4 для санитарно-бактериологического анализа воды»: изделие (1 флакон (50 дисков) - СИБ с лактозой; 1 пакет (50 дисков) - СИБ для определения оксидазы), инструкция по применению, паспорт (в комплекте поставки).
Системы индикаторные бумажные (СИБ) для идентификации микроорганизмов представляют собой диски диаметром 9-10 мм (СИБ-диски с лактозой) и 35-36 мм (СИБ-диски для определения оксидазы) или полоски шириной 7-8 мм, длиной 70-80 мм из бумаги хроматографической, содержащие определенные количества реагентов (субстратов в сочетании с индикатором), стабилизированные поливиниловым спиртом. Гигроскопичны, при хранении на свету возможно изменение цвета.
Таблица 1
Описание основных функциональных элементов изделия
|
Наименование СИБ |
Основной реагент СИБ |
Индикатор |
Стабилизатор |
Внешний вид СИБ в сухом виде |
|
СИБ с лактозой |
D(+) лактозы моногидрат |
Феноловый красный |
Спирт поливиниловый |
Диски от оранжевого до красного цвета |
|
СИБ для определения оксидазы |
N,N-диметил-п-фенилендиамин сернокислый, a-нафтол |
– |
Спирт поливиниловый
|
Полоски от серовато-сиреневого до темно-фиолетового цвета |
ПРИНЦИП АНАЛИТИЧЕСКОГО МЕТОДА И ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ
Принцип действия основан на определении общих и термотолерантных колиформных бактерий по их способности к образованию кислоты и газа при ферментации лактозы и отсутствию оксидазной активности.
Характер ферментации лактозы оценивают по газообразованию и изменению окраски среды вследствие образования органических кислот (уменьшение рН), вызывающих изменение окраски индикатора.
Определение оксидазной активности. В присутствии оксидаз бактерий происходит перенос электронов к N,N-диметил-п-фенилендиаминy, из него образуется индофенол – вещество синего цвета.
ОСНОВНЫЕ ПОТРЕБИТЕЛЬСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Набор реагентов «Системы индикаторные бумажные для идентификации микроорганизмов. Наборы № 3, 4 для санитарно-бактериологического анализа воды» рассчитаны на проведение 50 анализов (для каждого варианта исполнения). Изделие предназначено для лабораторной диагностики, для однократного применения по назначению. Вид аналита – качественный. Не требует ремонта и технического обслуживания.
Пользователями изделия могут быть специалисты бактериологических лабораторий лечебно-профилактических учреждений или учреждений, осуществляющих санитарно-эпидемиологический надзор, с высшим и средним специальным образованием, прошедшие специальную подготовку и допущенные к работе с патогенными микроорганизмами в соответствии с СП 1.3.2322-08.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Время срабатывания:
- СИБ для определения оксидазы от 30 до 60 с;
- СИБ с лактозой от 5 до 18 ч
Чувствительность: При суспендировании или нанесении на полоску (диск) полной бактериологической петли культуры положительно реагирующих тест-штаммов бактерий семейства Enterobacteriaceae должен изменяться цвет раствора (после погружения СИБ-диска с лактозой) или цвет полоски (диска) (после нанесения культуры тест-штамма) и выделяться газ спустя время срабатывания в соответствии с таблицей учета результатов испытаний и биохимическими характеристиками тест – штаммов.
Специфичность (правильность дифференциации тест-штаммов бактерий семейства Enterobacteriaceae от тест-штаммов бактерий других групп): Тест-штаммы бактерий семейства Enterobacteriaceae и бактерий других групп должны изменять цвет раствора (после погружения СИБ-диска с лактозой) или цвет полоски (диска) (после нанесения культуры тест-штамма) и выделять газ спустя время срабатывания в соответствии с таблицей учета результатов испытаний и биохимическими характеристиками тест – штаммов.Потенциальный риск применения набора – класс 2б.
Изделие Набор реагентов «Системы индикаторные бумажные для идентификации микроорганизмов. Наборы № 3, 4 для санитарно-бактериологического анализа воды» является безопасным Изделие не приносит вреда окружающей природной среде и здоровью человека при транспортировании, хранении, применении. Утилизация изделий, не прошедших контроль (забракованные изделия), а также с истекшим сроком годности и неиспользованных изделий, не требует специальных мер безопасности, которые уничтожаются в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами».
Однако, исследуемые материалы, а также их растворы, оборудование и материалы, находящиеся с ним в контакте, представляют собой потенциально инфекционный материал, при работе с которым необходимо соблюдать правила техники безопасности в соответствии с:
- ГОСТ Р 52905-2007 (ИСО 15190:2003) «Лаборатории медицинские. Требования безопасности»;
- СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней» (для бактериологических лабораторий учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор и лечебно-профилактических учреждений);
- СП 1.3.2518-09 «Дополнения и изменения № 1 к СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней;
- СП 1.3.2885-11 «Дополнения и изменения № 2 к СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».
Исследуемые образцы, оборудование и материалы, находящиеся с ними в контакте представляют собой потенциально инфекционный материал, и обращаться с ними следует осторожно:
- работать в боксированных помещениях для проведения микробиологических исследований с применением индивидуальных средств защиты (защитной одежды и одноразовых резиновых перчаток);
- не пипетировать ртом;
- в случае пролива образцов и рабочих растворов на рабочие поверхности, необходимо проводить дезинфекционную обработку с использованием дезинфицирующих средств, эффективность которых подтверждена в отношении используемого в работе возбудителя;
- инструменты и оборудование (до и после работы) подвергать обработке с использованием дезинфицирующих средств, эффективность которых подтверждена в отношении используемого в работе возбудителя;
- утилизировать все использованные материалы, а также их растворы, исследуемые образцы и их растворы в соответствии с действующими санитарными правилами работы с патогенными микроорганизмами.
ПЕРЕЧЕНЬ РИСКОВ, ИДЕНТИФИЦИРОВАННЫХ В ПРОЦЕССЕ АНАЛИЗА РИСКОВ И МЕРЫ ПО СНИЖЕНИЮ РИСКОВ ПРИ ПРИМЕНЕНИИ ИЗДЕЛИЯ
Объективные результаты анализа гарантируются при выполнении следующих условий:
- для получения четких результатов необходимо соблюдение температурного режима термостата (37±1) °С и (44±1) °С, рН применяемых питательных сред и режима обработки посуды.
- соблюдения условий хранения (при температуре от 2 до 25 оС в герметично укупоренном виде) и транспортирования, изделия, транспортированные и хранившиеся с нарушением температурного режима, применению не подлежат;
- не использовать изделие с истекшим сроком годности;
- не использовать изделие при отсутствии на его упаковке соответствующей маркировки, нарушении целостности упаковки компонентов и компоненты от разных серий изделия;
- компоненты изделия после вскрытия флакона (пробирки, пакета) пригодны к использованию в течение срока годности, при условии хранения в закрытых пробкой флаконах (пробирках, пакетах) сухом и защищенном от света месте, при температуре от 2 до 25 °С.
- исследования проводят с чистой культурой, а также с отдельными колониями с
питательного агара для выделения и культивирования энтеробактерий (среда Эндо) или с мембранного фильтра, помещенного после фильтрации на среду Эндо;
- погружение дисков с лактозой в пробирки производят обожженным пинцетом;
- критерием правильности учета реакции должны быть четкие различия в окраске по
сравнению с контролем.
ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С ИЗДЕЛИЕМ
АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Исследования проводят с чистой культурой, а также с отдельными колониями с питательного агара для выделения и культивирования энтеробактерий (среда Эндо) или с мембранного фильтра, помещенного после фильтрации на среду Эндо, полученными из материала для санитарных и бактериологических исследований водных объектов, в том числе холодной и горячей воды централизованного водоснабжения, воды нецентрализованного водоснабжения, воды, расфасованная в емкости, воды бассейнов и др. Для отбора проб используют чистую стерильную посуду, не содержащую следов дезинфицирующих растворов. Стерилизацию посуды и других средств забора материала проводят автоклавированием, сухим жаром или кипячением в 2%-м растворе пищевой соды.
Требования к отбору, транспортировке и хранению до исследования анализируемых образцов в соответствии с ГОСТ 31942-2012 (ISO 19458:2006) «Вода. Отбор проб для микробиологического анализа» и в соответствии с МУК 4.2.1018-01 «Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды».
ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Для получения культур и проведения исследования используют питательные среды в соответствии с МУК 4.2.1018-01.
Питательный бульон рН (7,3±0,2) готовят из сухой питательной среды промышленного производства (ГОСТ 20730-75 или ТУ 9398-021-78095326-2006 или аналогичного) по способу, указанному производителем, после растворения ингредиентов устанавливают рН (7,3±0,2), разливают по 1 мл в пробирки, стерилизуют автоклавированием при (121+1) оС в течение 15 мин.
Определение оксидазной активности. Проводят штрихом или на мембранном фильтре:
а) штрихом: культуру, выросшую на поверхности среды Эндо в течение 18-24 ч при температуре (37±1) °С, растирают платиновой петлей или стеклянной палочкой на полоске (диске) СИБ для определения оксидазы, помещенной в чашку Петри и предварительно смоченной стерильной дистиллированной водой. На одной полоске (диске) можно исследовать 10-14 культур (не более). Время проявления положительной реакции – 30 – 60 с. Если при исследовании колоний темно-красного цвета получен недостаточно четкий результат, культуру пересевают со среды Эндо на питательный агар, инкубируют при температуре (37±1) °С в течении 3-6 ч и пробу повторяют.
б) на мембранном фильтре: мембранный фильтр после фильтрации с выросшими на нем колониями после инкубации на среде Эндо в течение 22-26 ч при температуре (37±1) °С помещают пинцетом, не переворачивая, на диск СИБ для определения оксидазы, помещенный в чашку Петри и предварительно смоченный стерильной дистиллированной водой. Время проявления положительной реакции может варьировать в зависимости от марки используемого мембранного фильтра. Не позднее 5 мин после появления признаков положительной реакции, мембранный фильтр переносят обратно на среду Эндо. Результат учитывают после четкого проявления реакции.
Оксидазоположительные колонии из дальнейших исследований исключают.
Определение характера ферментации лактозы.
В пробирки с 1 мл питательного бульона рН (7,3±0,2) суспендируют полную петлю культуры отобранных оксидазоотрицательных колоний, затем погружают в пробирку диск СИБ с лактозой. Среда в пробирках в результате быстрой диффузии в нее индикатора становится красной. Для учета газообразования в пробирки помещают небольшой комочек стерильной гигроскопической ваты. В качестве контроля служат СИБ-диски с лактозой, погруженные в пробирки 1 мл воды пептонной 0,5 % или питательного бульона рН (7,3±0,2).
а) для подтверждения наличия общих колиформных бактерий посевы инкубируют при температуре (37±1) °С. При наличии четой положительной реакции результат может быть учтен через 4-6 ч. Если реакция отрицательная, пробирки с посевами просматривают через 24 ч. Окончательный учет отрицательного результата через 48 ч.
б) для подтверждения наличия термотолерантных колиформных бактерий посев осуществляют в пробирки с 1 мл питательного бульона рН (7,3±0,2) с СИБ с лактозой, предварительно подогретую до температуры (44±1) °С, затем инкубируют при температуре (44±1) °С. При наличии четой положительной реакции результат может быть учтен через 4-6 ч. Окончательный учет отрицательного результата через 24 ч.
РЕГИСТРАЦИЯ И УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Регистрацию результатов анализа проводят визуально.
Учет результатов производят в соответствии с таблицей 2 и МУК 4.2.1018-01.
Таблица 2
Учет результатов испытаний
|
Тесты |
Цвет раствора после погружения СИБ-диска |
Время срабатывания |
Результат испытаний |
|
|
положительный |
отрицательный |
|||
|
Оксидазная активность (СИБ для определения оксидазы) |
-
|
30-60 с |
синий (колонии приобретают синий ободок или синеют полностью) |
окрашивание отсутствует |
|
Ферментация лактозы (СИБ с лактозой)
|
красный |
5-18 ч |
цвет среды желтый или оранжевый, наличие газа |
цвет среды красный, газ отсутствует или цвет среды желтый или оранжевый, газ отсутствует |
Интерпретацию результатов и вывод о наличии в образце общих и термотолерантных колиформных бактерий проводят в соответствии с МУК 4.2.1018-01.
Транспортирование должно проводиться всеми видами крытого транспорта при температуре от 2 до 25 °С. Допускается транспортирование при температуре от минус 20 до 2 °С не более 14 суток.
Хранение при температуре от 2 до 25 °С в защищенном от света месте.
Набор № 3. При вскрытии флакона (пробирки) в асептических условиях компоненты набора подлежат хранению до истечения срока годности в герметично закрытом(ой) флаконе (пробирке) при температуре от 2 до 25 оС в защищенном от света месте.
Набор № 4. При вскрытии флакона (пакета) в асептических условиях компоненты набора подлежат хранению до истечения срока годности в герметично закрытых флаконах при температуре от 2 до 25 оС в защищенном от света месте.