Набор реагентов «Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая (Железо- глюкозо-лактозный агар, двухслойный)» предназначен для идентификации энтеробактерий по их способности ферментировать глюкозу и лактозу, образовывать сероводород и расщеплять мочевину (при добавлении реактива к среде ex temporo). Изделие для диагностики ин витро. Функциональное назначение - вспомогательное средство в диагностике.
Принцип метода - визуальное обнаружение энтеробактерий, выросших на питательной среде при посеве исследуемых образцов.
Набор реагентов представляет собой комплект из двух компонентов: № 1 для нижнего и № 2 для верхнего слоев среды, получаемый смешиванием сухих ингредиентов из расчета г/л:
Компонент №1 «Нижний слой»
Экстракт кормовых дрожжей - 0,15
Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей - 3,0
Д-глюкоза - 1,2
Натрий серноватистокислый безводный - 2,04
Динатрий фосфат обезвоженный - 0,60
Феноловый красный водорастворимый - 0,02
Бриллиантовый зеленый - 0,001
Агар микробиологический - 1,5±0,1
Компонент № 2 «Верхний слой»
Экстракт кормовых дрожжей - 0,35
Д(+)-лактоза - 9,52
Динатрий фосфат обезвоженный - 3,22
Соль Мора - 0,56
Феноловый красный водорастворимый - 0,056
Натрия додецилсульфат - 0,042
Агар микробиологический - 6,30±0,1
Набор реагентов «Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая (Железо- глюкозо-лактозный агар, двухслойный)» выпускается в виде комплекта из двух банок с каждым компонентом среды: компонент № 1 «Нижний слой» - по 65,85,106 г, компонент № 2 «Верхний слой» по 150, 200, 250 г в полиэтиленовых банках вместимостью 350, 500 мл соответственно с инструкцией по применению, паспорт (в комплекте поставки). Ремонту и обслуживанию не подлежит.
Специфическая активность (чувствительность среды, скорость роста и дифференцирующие свойства).
При посеве в 3 пробирки со средой по одной бактериологической петле, диаметром 2 мм питательная среда должна обеспечивать рост каждого из тест-штаммов: Shigella flexneri la 8516, Escherichia coli 3912/41 (055:K59), Proteus vulgaris HX 19 222, Citrobacter freundii 58/57, Salmonella typhi H-901 ГДР/ГИСК через 20-24 ч инкубации при температуре (37+1) °С с соответствующим проявлением тестов:
|
Штаммы |
Ферментация глюкозы |
Ферментация лактозы |
Образование сероводорода |
Расщепление мочевины |
|
Shigella flexneri la 8516 |
+ |
|
- |
“ |
|
Escherichia coli 3912/41 (055:K59) |
+Г |
+ |
“ |
|
|
Salmonella typhi H-901 ГДР/ГИСК |
+ |
“ |
+ |
|
|
Citrobacter freundii 58/57 |
+г |
+ |
+ |
“ |
|
Proteus vulgaris HX 19 222 |
Учет затруднителен (реакция маскируется) |
Учет затруднителен (реакция маскируется) |
+ |
+ |
Примечание.
1) Ферментация глюкозы:
+ (положительная реакция)- пожелтение столбика среды (для штамма Shigella flexneri la 8516 возможно пожелтение среды «по уколу»);
Г (газообразование) - разрывы (пузырьки) внутри столбика среды
2) Ферментация лактозы:
+ (положительная реакция) - пожелтение скошенной части среды;
- (отрицательная реакция) — отсутствие пожелтения скошенной части среды.
3) Образование сероводорода:
+ (положительная реакция) - почернение верхней части столбика среды;
- (отрицательная реакция) - отсутствие почернения среды
4) Расщепление мочевины:
+ (положительная реакция) - окрашивание в малиновый цвет всей или только скошенной части среды;
- (отрицательная реакция) - отсутствие малинового окрашивания среды.
Потенциальный риск применения изделия - класс 2 б.
При работе необходимо соблюдать правила техники безопасности в соответствии с ГОСТ Р 52905-2007 «Лаборатории медицинские. Требования безопасности», СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней»; СП 1.3.2518-09 «Дополнения и изменения № 1 к СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней; СП 1.3.2885-11 «Дополнения и изменения № 2 к СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».
Соблюдение «Правил устройства, техники безопасности производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения» (Москва, 1981 г.).
Утилизация изделий, пришедших в негодность, с истекшим сроком годности и изделий после контакта с биологическими образцами осуществляется в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами».
Объекты исследований в санитарной и клинической микробиологии.
Приготовление питательной среды.
Компонент №1 «Нижний слой». Компонент в количестве, указанном на этикетке, размешивают в 300 мл дистиллированной воды, кипятят 1-2 мин, охлаждают до температуры 48-52 °С, добавляют 2,4 мл 50 % раствора мочевины*, разливают по 2 мл стерильной пипеткой в стерильные пробирки и оставляют для застывания «столбиком».
Компонент №2 «Верхний слой». Компонент в количестве, указанном на этикетке, размешивают в 700 мл дистиллированной воды, кипятят 1-2 мин, охлаждают до температуры 48- 52 °С, разливают стерильной пипеткой по 4,5 мл в стерильные пробирки поверх застывшего «нижнего слоя» и скашивают, оставив столбик высотой около 20 мм.
Готовая среда красного цвета. Готовая среда может быть использована в течение месяца при условии хранения при температуре 2-8 °С.
* Примечание
Приготовление 50 % раствора мочевины: 50 г мочевины ТУ (6-09-2117) растворяют в 50 г дистиллированной воды, выдерживают 2-3 сут при температуре 18-22°С для самостерилизации. Готовый раствор можно хранить при температуре 18-22 °С в течение месяца.
Для проверки стерильности обоих компонентов среды по 5 пробирок с отдельно разлитыми «нижним» и «верхним» слоями среды выдерживают при температуре (37+1) °С в течение 40-48 ч. (Наличия роста микроорганизмов и изменения цвета среды не должно быть).
Посев исследуемого материала проводить согласно «Методическим указаниям по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями» (М„ 1984 г) и приказом Минздрава СССР от 22.04.85 № 535 «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследований, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений»
Регистрацию результатов анализа проводят визуально, по наличию роста колоний.
Учет результатов производят согласно «Методическим указаниям по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями» (М„ 1984 г) и приказом Минздрава СССР от 22.04.85 № 535 «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследований, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебнопрофилактических учреждений».
Набор реагентов «Питательная среда для идентификации энтеробактерий сухая (Железо- глюкозо-лактозный агар двухслойный)» необходимо хранить в герметично закрытой упаковке, в сухом, защищенном от света месте при температуре от 2 до 25 °С.
Транспортирование должно проводиться при температуре от 2 до 25 °С всеми видами крытого транспорта.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей Инструкции по применению.